中东呼吸综合征冠状病毒实验室检测技术简述

中东呼吸综合征冠状病毒感染的常规检测方法是通过实时反转录PCR反应和测序鉴定。有适当经验和生物安全条件的实验室可以尝试用细胞分离病毒检测，但不属于常规检测，本指南中未包含病毒分离的步骤。此外，鉴于我国尚无中东呼吸综合征冠状病毒标准毒株和血清学检测试剂，此版技术指南暂不包括血清学检测内容。

任何中东呼吸综合征冠状病毒的检测都必须在适当条件的实验室由经过相关技术安全培训的人员进行操作。

目前病毒核酸的检测方法主要有检测E蛋白上游基因（upE）、ORF1b基因和ORF1a基因三种。这些方法均高度敏感，检测ORF1b基因的方法不如针对ORF1a的方法敏感，但比其更加特异。另外，已确定了中东呼吸综合征冠状病毒基因组中位于RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）和衣壳蛋白（N）基因的几个适合测序验证的靶序列。

在实验室要确认一个样本为阳性，需要满足以下两个条件的其中

一个：

（一）至少两种中东呼吸综合征冠状病毒特异性PCR结果阳性；

（二）一种PCR结果为阳性，另外一种PCR产物序列测序，与已知序列相符。

当针对中东呼吸综合征冠状病毒的两种不同的检测方法结果不一致的时候，应当采用反转录PCR扩增，对扩增产物进行测序以确认检测结果。

阴性结果也不能排除临床病人的感染，一些因素可能产生假阴性，包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如；病毒变异，PCR抑制等。